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Plateau technique Xylobiotech : biotechnologies forestières
ArbreBois

Plateau technique de l'INRA Val de Loire

INRA, Centre Val de Loire - Orléans, 2163, Avenue de la pomme de pin, CS 4001 Ardon, 45075 Orléans cedex 2

  • Tel : +33 (0)2 38 41 78 24 (Accueil, P. Montes)
  • F. Laurans, responsable INRA activités XYLOBIOTECH
  • M.C. Lesage-Descauses, responsable INRA activités XYLOBIOTECH
  • Fax : +33 (0)2 38 41 48 09
  • Email :

Présentation générale :

Le site INRA de XYLOBIOTECH met à disposition des utilisateurs un microscope confocal à balayage laser Zeiss LSM 700 ainsi que des protocoles de préparation des échantillons végétaux et une expertise en anatomie cellulaire végétale.

Cet équipement permet à la fois les observations en fluorescence multiple associées à l'analyse de colocalisation, l'imagerie 3D et l'imagerie spectrale. Il offre également la possibilité de réaliser de l'imagerie de cellules vivantes (FRAP, FLIP, photoactivation et photoconversion) afin d'étudier les processus de transport dans les cellules.

Le microscope est localisé dans le laboratoire d'histocytologie de l'Unité de Recherche AGPF (Amélioration, Génétique et Physiologie Forestières) dédié à l'étude de la formation du bois. Ce laboratoire possède une expertise reconnue en histologie et observation microscopique adaptée à l'étude de la formation du bois.

Ingénieur responsable du plateau technique INRA de XYLOBIOTECH :

Françoise Laurans  (IR2 INRA - UR AGPF)
+33 (0)2 38 41 78 38
Email:

Conditions d'accès au plateau technique :

L'utilisation de cet équipement XYLOBIOTECH nécessite l'expertise de l’ingénieur responsable du plateau technique INRA qui en assure le fonctionnement et propose des actions d'aide à la conception d'expérience, de conseil et d'accompagnement pratique pour l'expérimentation et la préparation des échantillons.

Pour toute demande prendre contact avec l'ingénieur responsable. Un premier entretien permettra de fixer les conditions de la prestation XYLOBIOTECH. Les attentes de l’utilisateur dans le cadre des possibilités techniques offertes par le plateau technique seront ensuite formalisées dans une fiche de demande de travaux.
Chaque demande fera l'objet d'un devis sur mesure et des frais de gestion de dossier seront d'office imputés.

Le plateau est accessible du Lundi au Jeudi de 8h30 à 18h00.

Description du matériel :

Microscope confocal à balayage laser

Microscope    Zeiss LSM700
Statif    Droit  Axio Imager Z2 sur table antivibration
Raies Lasers Diodes lasers  405 nm, 488 nm,  555 nm, 639 nm
Filtres    DAPI, GFP, CY3/Rhodamine
Détecteurs    2 détecteurs PMT en réflexion, 1 détecteur en transmission
Objectifs     10x/0,3 M27 Plan-Néofluar
20x/0,8 M27 Plan-Apochromat coulisseau DIC
40x/1,0DICM27 Plan-Apochromat
63x/1,40 oil DIC M27 Plan-Apochromat
Source de lumière Fluorescence Metal halide (120W), lumière blanche halogène 100W
Déplacement XY Platine piezo  motorisée Joystick
Déplacement Z Motorisé précision de 10 nm
Vitesse d'acquisition 5 images/seconde
Acquisition d'images Images multi-marquages 2D 3D
En simultané ou séquentiel
Séparation spectrale
FRAP (FLIP)
FRET
Logiciel d'acquisition ZEN 2010

Exemples de prestations et coûts associés :


***************************Exemple de réalisation 1****************************

Colocalisation dans les parois cellulaires des fibres de bois de peuplier après immunomarquage sur coupes semi fines (images à basse définition dédiées au site web).

Immunlocalisation de deux classes de composés pariétaux dans les parois cellulaires des fibres de bois en microscopie confocale

A Image en transmission
B Colocalisation des 2 anticorps
C Localisation du premier anticorps marqué Alexa 488
D Localisation du deuxième anticorps marqué Alexa 633


Barre d’échelle =  20 µm

Nombre de coupes observées :  24
Durée de réalisation : 8 heures
Coût : 400 € HT

Le coût ne tient pas compte de la réalisation des coupes et de l'expérience d'immunomarquage. Il comprend uniquement les frais d'observation

***************************Exemple de réalisation 2****************************

Microphénotypage de plants de peupliers transgéniques produits par transformation combinatoire et affectés pour le métabolisme de la lignine (images à basse définition dédiées au site web). L’analyse à l’échelle microscopique du xylème montre une autofluorescence forte des parois cellulaires autour des vaisseaux.

Autofluorescence des parois cellulaires du xylème dans le phénotype sauvage (A, B et C) et pour une lignée transgénique (D, E et F) observée au microscope confocal (excitation 488 nm, LP filter 490 nm). A et E : image en transmission

Barre d’échelle =  50 µm.

Nombre de coupes observées : 18
Durée de réalisation : 4 heures
Coût : 200 € HT

Le coût ne tient pas compte de la réalisation des coupes. Il comprend uniquement les frais d'observation.



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